ПЦР анализ в гинекологии: показания, правила подготовки, забора материала и проведения

Взятие гинекологического мазка с последующим исследованием его с помощью ПЦР открывает возможности для диагностики инфекций, передаваемых половых путём. Открыто данное исследование было в 80-х годах 20 века.

Ученый, разработавший его, получил Нобелевское вознаграждение. Открытие позволяет узнавать возбудителя заболеваний при его минимальной концентрации в половых путях.

Высокая точность инновационной ПЦР-диагностики делает её незаменимым исследованием во многих сложных клинических случаях.

Методика исследования

Суть метода полимеразной цепной реакции заключается в размножении участка ДНК. Порой для возникновения симптомов определённых заболеваний необходима мизерная концентрация бактерий или вирусов.

Большинство микробиологических исследований не могут обнаружить патогенные организмы в таком разведении, а тем более их с точностью подсчитать.

В таких случаях только и выручает метод активного полимеразного наращивания.

ПЦР-диагностика требует для исследования участок ДНК, который подвергается клонированию.

К биологическому материалу добавляют различные реагенты, которые комплиментарно достраиваются к участкам выделенного генетического материала.

Многократное преумножение ДНК позволяет определить не только род, но и вид бактериологического или вирусного материала. Уточнение вида возбудителя делает лечение максимально эффективным и этиотропным.

ПЦР анализ в гинекологии: показания, правила подготовки, забора материала и проведения

Мазки ПЦР в гинекологии позволяют выделить возбудителей хламидиоза, гонореи, микоплазмоза, уреаплазмоза и многих других опасных инфекций. Часто эти заболевания долго существуют в скрытых, латентных формах и долго не проявляются клиническими симптомами. ПЦР позволяет выявить их на ранних стадиях и наиболее своевременно начать лечение.

Среди явных преимуществ полимеразной реакции выделены:

  1. Высокая точность определения природы патогенного микроорганизма.
  2. Возможность выделения вируса или бактерии при мизерных их концентрациях в биологическом материале.
  3. Анализы проводятся достаточно быстро.
  4. Заражение некоторыми микроорганизмами можно выявить только с помощью ПЦР. Вирус иммунодефицита также возможно выделить иди подтвердить с помощью данного диагностического мероприятия.

Исследование в гинекологии

В гинекологической практике мазок на ПЦР используется довольно широко. Ведь он позволяет выявить возбудителей большинства воспалительных заболеваний женских половых органов наружной и внутренней локализации. Анализ проводят женщинам, активно живущим половой жизнью, беременным пациенткам и проходящим прегравидарную подготовку.

  • Мазок ПЦР на ИППП нередко выявляет не только опасные бактериальные инфекции, но и заражение вирусами герпеса или папилломы человека. Последние и вовсе являются онкогенными провокаторами, излюбленным местом которых является ткань шейки матки.
  • ПЦР помогает выявить хламидии у беременных женщин, которые не обследовались на данную инфекцию до зачатия. Бактерия может вызывать различные уродства и пороки развития плода, а также вовсе прекращать его развитие. Носительство хламидий может долгое время не проявляться, быть выявлено лишь во время беременности как причина внутриутробной гибели зародыша. Но и при своевременном обнаружении бактерий у женщин «в положении» предоставляется возможным провести лечение без урона для матери и плода.

Является ошибочным мнение, что взятие мазков ПЦР на ИППП при беременности создает угрозу выкидыша.

Соскоб для исследования действительно берут из шейки матки, но таким образом, что не затрагивают растущий эмбрион.

К тому же, данная анатомическая область по длине составляет около 4 см вне беременности и несколько уменьшается на поздних сроках гестации. Это позволяет достаточно безопасно взять материал для исследования.

ПЦР анализ в гинекологии: показания, правила подготовки, забора материала и проведения

Увеличивают достоверность анализа некоторые простые правила, которые следует соблюдать женщинам перед исследованием:

  1. Пациенткам рекомендуется не мочиться 2-3 часа до выполнения соскоба из шейки матки.
  2. За день до взятия материала необходимо отменить прием антибактериальных и бактериостатических средств.
  3. Вне беременности лучше сдавать мазок в середине менструального цикла. Неблагоприятным периодом считается время до начала менструального кровотечения или сразу после него.
  4. 2-3 дня не рекомендуется использовать локальные средства контрацепции или любые другие вагинальные медикаменты.
  5. Сутки до исследования нельзя иметь половые отношения.
  6. Накануне взятия пробы запрещается принимать душ и обмывать наружные половые органы.
  7. Нельзя брать соскоб из шейки матки в тот же день, когда проводилось кольпоскопическое исследование.

Довольно простые рекомендации позволят наиболее точно определить заболевание, передающееся половым путем, по генетическому материалу его возбудителя.

Показания для ПЦР

Полимеразная реакция как метод диагностики представляет собой новый и инновационный способ идентификации микроорганизмов. К его помощи активно прибегают в следующих случаях:

  1. При установлении причин бесплодия. Невозможность зачать ребенка часто связана с инфекцией половых органов, которую тяжело распознать обычными способами. Латентное течение многих инфекций определяет склонность к прерыванию беременности, несостоятельности имплантации плодного яйца.
  2. При установленной природе инфекционного возбудителя ПЦР проводится для выяснения фазы заболевания: острой или хронической.
  3. Мазки ПЦР у женщин берут в случае тяжело протекающих беременностей. Внутриутробные инфекции, приобретенные до беременности и в ее активное течение, вызывают задержку развития и гибель плода. Рождение детей с аномалиями развития заставляет обследовать мать повторно в послеродовом периоде.
  4. В ходе диагностической процедуры возможно установить также чувствительность и устойчивость микроорганизмов к антибиотикам.

Несмотря на кажущуюся сложность, проведение полимеразной реакции продолжатся не более 4 дней. Это время необходимо для построения полноценной молекулы ДНК, которую удается идентифицировать с конкретным микроорганизмом. Взятие биологического материала как субстрата для анализа и вовсе занимает до 5 минут.

Результат ПЦР-метода имеет два варианта интерпретации: позитивный либо негативный:

  • Положительный ответ полимеразной реакции подтверждает наличие в материале микробных следов, а также указывает род и вид возбудителя.
  • Отрицательный результат говорит о стерильности биологического материала, отсутствии бактерий и вирусных частиц.

На основе расшифровки мазка врач определяется с методикой лечения.

Этиотропные антибиотикотерапия или противовирусное лечение позволяют быстро и бесследно очистить микрофлору от возбудителя опасных инфекций.

Своевременная диагностика не позволяет навредить и растущему плоду во время беременности матери – при проведении терапевтических курсов эрадикации возбудителей инфекций, передающихся половым путем.

Анализ ПЦР

ПЦР (метод полимеразной цепной реакции) — экспериментальный метод, использующийся при лабораторной диагностике многих инфекционных заболеваний и позволяющий обнаружить большинство микроорганизмов.

ПЦР анализ в гинекологии: показания, правила подготовки, забора материала и проведения

С помощью этого анализа можно выявить и идентифицировать в биоматериале следы различных микроорганизмов, даже если они присутствуют в очень малых количествах.

Метод полимеразной цепной реакции был открыт и впервые использован в 1983 г. В 1993 году создатель анализа ПЦР был награжден Нобелевской премией за бесценный вклад в развитие медицины.

Лечитесь выгодно и эффективно!

Акция для женщин: Комплексная диагностика ПОЛОВЫХ ИНФЕКЦИЙ Полная стоимость комплексного обследования по прейскуранту — 4090 рублей. Цена со скидкой — 3500 рублей

Акция для мужчин: Комплексная диагностика ПОЛОВЫХ ИНФЕКЦИЙ Полная стоимость комплексного обследования по прейскуранту — 5100 рублей. Цена со скидкой — 3500 рублей

У каждого живого организма имеется свой уникальный набор хромосом. Ни у одного существа он не повторяется, но все хромосомы образованы ДНК — дезоксирибонуклеиновой кислотой. ДНК состоит из множества мельчайших молекул, называемых нуклеотидами.

Последовательности цепочек этих молекул образуют гены. Гены же отвечают за кодировку синтеза огромного количества белков, таких, как глобулин, коллаген и т. д.

Последовательность нуклеотидов у каждого организма уникальна, за исключением схожих участков ДНК, отвечающих за относительное однообразие в пределах вида организма. Методом ПЦР находят фрагменты нуклеиновой кислоты и определяют, какому виду микроорганизма они принадлежат.

Но анализ ДНК небольшого количества микробов будет малоинформативен. Чтобы иметь возможность выявить и исследовать определенные видовые закономерности, необходимо увеличить количество нуклеотидов во много сотен раз. Для этого также используют методику ПЦР.

Чтобы получить достаточное количество материала для проведения исследования, к ДНК микроорганизма добавляют определенные нуклеотиды, а также ДНК-полимеразу. Этот фермент обеспечивает многократное копирование интересующего исследователей участка.

Катализатором (веществом, запускающим реакцию) процесса служат нити РНК, крепящиеся к гену, который и необходимо изучить. За несколько часов анализа всего из одного нуклеотида можно получить достаточное количество материала для исследований.

Этапы анализа

  1.   Сбор и доставка в лабораторию биоматериала человека (слюны, крови, мочи или любой другой биологической жидкости).
  2.   Очищение нужной хромосомы и разделение двух образующих ее нитей ДНК.
  3.   Выделение требующегося нуклеотида и дальнейшее его удвоение.

    Далее количество копируемого материала стремительно увеличивается в геометрической прогрессии.

  4.  Разделение участков ДНК реакцией электрофореза, обработка растворами, вызывающими свечение или изменение цвета ДНК. Анализ устанавливает вид искомого микроорганизма.

Длительность анализа ПЦР обычно составляет от трех до пяти часов, но результаты приходят в клинику не ранее, чем через сутки.

Преимущества метода ПЦР

На данный момент метод ПЦР — один из лучших способов определения возбудителей инфекции по нескольким причинам:

  1.   Специфичность — определение конкретного вида возбудителя, что облегчает подбор лечения.
  2.   Высокая точность за счет определения ДНК возбудителя, а не выявления антител, вырабатываемых организмом.
  3.   Минимум биоматериала. Для диагностики хватает количества материала в сотни раз меньшего, чем требуется при других анализах.
  4.   Возможность проанализировать практически любой биоматериал. Обнаруживает следы возбудителя в биологических жидкостях и в других клетках организма.
  5.   Возможность диагностировать бессимптомные инфекции.
  6.   Высокая скорость получения результатов анализа.
  7.   Автоматизация процесса диагностики.
  8.   Исключение контакта посторонних с биоматериалом, что, в свою очередь, исключает возможность заражения.

Недостатки метода ПЦР

Проблемы в основном связаны с технической сложностью процесса:

  1.   Необходим правильный подбор РНК для катализации процесса и приготовление подходящей смеси нуклеотидов.
  2.   Из-за крайне высокой чувствительности при инфицировании сразу несколькими микроорганизмами метод может дать неверный результат.
  3.   Необходимость сравнения биообразцов с препаратами, в которых заведомо находится ДНК искомого микроорганизма.
  4.   Для повышения точности диагностики необходимо как можно тщательнее очистить нити ДНК от любых посторонних примесей, что повышает сложность анализа.

Ложноположительные и ложноотрицательные результаты

Ошибки анализа обусловлены двумя факторами:

  1. Для ложноотрицательных результатов такой фактор — нарушение техники проведения анализа.
  2. Для ложноположительных — случайное совпадение нуклеотидов или применяемых при исследовании реактивов с ДНК микроорганизма.

Следует учитывать, что даже при идентификации микроорганизма не всегда можно с уверенностью сказать, послужил ли он причиной болезни. К сожалению, генетическая основа множества неинфекционных заболеваний все еще неизвестна, что делает невозможной диагностику многих патологий.

Показания для назначения исследования ПЦР

Назначение ПЦР-диагностики оправдано в случае инфекционных заболеваний и необходимости определить природу возбудителя.

Также метод ПЦР применяется при:

  • необходимости точной идентификации возбудителя;
  • диагностике некоторых генетических заболеваний;
  • анализе образцов биопсии, исследование которых стандартными методами невозможно;
  • необходимости идентификации личности путем сравнения части ДНК человека с биоматериалом заведомо известного происхождения;
  • диагностике злокачественных новообразований и лейкоза;
  • проведении генетических экспериментов с животными с заложенными еще до их рождения генетическими заболеваниями.

Также есть много возможных способов применения анализа ПЦР при проведении исследований в области медицины и биологии, от испытания степени эффективности лекарств уже на молекулярном уровне и до создания полностью автономных живых организмов с определенными свойствами.

На данный момент ПЦР-анализ применяется для диагностики достаточно обширного круга заболеваний, например:

  • Самых страшных заболеваний — ВИЧ-инфекции и гепатитов А, В, С, Е;
  • заболеваний, передающихся половым путем (ИППП);
  • туберкулеза;
  • внутриклеточных инфекций (вирусы, бактерии) и многих других болезней.

При подозрении на наличие ЗППП направление выдает гинеколог, уролог или андролог. При туберкулезе исследование назначает фтизиатр, а при подозрении на ВИЧ или вирусные гепатиты — инфекционист. Также для более точной постановки диагноза ПЦР используют онкологи, онкогематологи, генетики.

Подготовка к сдаче анализа

  • За 72 часа до сдачи биоматериала на ПЦР нужно полностью отказаться от употребления алкоголя. Также по назначению врачей могут быть отменены некоторые антибиотики.
  • За 48 часов необходимо исключить нагрузки. В день сдачи биоматериала запрещается принимать пищу, а также курить.
  • При необходимости сдачи материала на анализ из ротовой полости или носоглотки запрещается в день исследования чистить зубы.

При диагностике ЗППП:

  1. Не вступать в половой контакт 48 часов до анализа.
  2. Подмываться разрешено без любых гигиенических средств, последнее спринцевание не позже чем за 12 часов.
  3. За 2 часа до взятия биоматериала не мочиться.
  4. Запрещается сдавать анализ во время менструаций и на протяжении 4 дней после колоноскопии.

Точность и информативность диагностики будет зависеть от соблюдения этих несложных правил.

После получения результата исследования обязательно нужно обратиться к врачу, так как самостоятельная расшифровка медицинского заключения не даст достоверной информации о заболевании и методах его лечения.

Расшифровка результатов

Результат ПЦР всегда однозначен: он либо положительный, либо отрицательный. Отрицательный означает, что человек здоров, так как следов чужеродной ДНК не выявлено. Положительный же подразумевает наличие у человека фрагментов ДНК чужеродных микроорганизмов, что означает заражение. В таком случае требуется лечение.

Так как ПЦР является высокоточным методом диагностики, даже если пациент не чувствует недомогания и не замечает у себя никаких симптомов болезни, это не означает что он здоров — скорее это значит, что анализ просто выявил возбудителя на ранней стадии, пока тот еще не успел навредить организму.

Начало терапии в таком случае нельзя откладывать, ведь чем быстрее начнется лечение, тем легче удастся побороть болезнь.

ПЦР-диагностика обнаруживает микроорганизмы даже по единственной молекуле ДНК в пробе. Именно поэтому анализ ПЦР — наиболее эффективный диагностический инструмент, позволяющий выявить болезнь практически на любой ее стадии и контролировать ход ее лечения.

Пцр анализ в гинекологии: показания, правила подготовки, забора материала и проведения

Взятие гинекологического мазка с последующим исследованием его с помощью ПЦР открывает возможности для диагностики инфекций, передаваемых половых путём. Открыто данное исследование было в 80-х годах 20 века.

Ученый, разработавший его, получил Нобелевское вознаграждение. Открытие позволяет узнавать возбудителя заболеваний при его минимальной концентрации в половых путях.

Высокая точность инновационной ПЦР-диагностики делает её незаменимым исследованием во многих сложных клинических случаях.

Методика исследования

Суть метода полимеразной цепной реакции заключается в размножении участка ДНК. Порой для возникновения симптомов определённых заболеваний необходима мизерная концентрация бактерий или вирусов.

Большинство микробиологических исследований не могут обнаружить патогенные организмы в таком разведении, а тем более их с точностью подсчитать.

В таких случаях только и выручает метод активного полимеразного наращивания.

ПЦР-диагностика требует для исследования участок ДНК, который подвергается клонированию.

К биологическому материалу добавляют различные реагенты, которые комплиментарно достраиваются к участкам выделенного генетического материала.

Многократное преумножение ДНК позволяет определить не только род, но и вид бактериологического или вирусного материала. Уточнение вида возбудителя делает лечение максимально эффективным и этиотропным.

Мазки ПЦР в гинекологии позволяют выделить возбудителей хламидиоза, гонореи, микоплазмоза, уреаплазмоза и многих других опасных инфекций. Часто эти заболевания долго существуют в скрытых, латентных формах и долго не проявляются клиническими симптомами. ПЦР позволяет выявить их на ранних стадиях и наиболее своевременно начать лечение.

Среди явных преимуществ полимеразной реакции выделены:

  1. Высокая точность определения природы патогенного микроорганизма.
  2. Возможность выделения вируса или бактерии при мизерных их концентрациях в биологическом материале.
  3. Анализы проводятся достаточно быстро.
  4. Заражение некоторыми микроорганизмами можно выявить только с помощью ПЦР. Вирус иммунодефицита также возможно выделить иди подтвердить с помощью данного диагностического мероприятия.

Исследование в гинекологии

В гинекологической практике мазок на ПЦР используется довольно широко. Ведь он позволяет выявить возбудителей большинства воспалительных заболеваний женских половых органов наружной и внутренней локализации. Анализ проводят женщинам, активно живущим половой жизнью, беременным пациенткам и проходящим прегравидарную подготовку.

  • Мазок ПЦР на ИППП нередко выявляет не только опасные бактериальные инфекции, но и заражение вирусами герпеса или папилломы человека. Последние и вовсе являются онкогенными провокаторами, излюбленным местом которых является ткань шейки матки.
  • ПЦР помогает выявить хламидии у беременных женщин, которые не обследовались на данную инфекцию до зачатия. Бактерия может вызывать различные уродства и пороки развития плода, а также вовсе прекращать его развитие. Носительство хламидий может долгое время не проявляться, быть выявлено лишь во время беременности как причина внутриутробной гибели зародыша. Но и при своевременном обнаружении бактерий у женщин «в положении» предоставляется возможным провести лечение без урона для матери и плода.

Является ошибочным мнение, что взятие мазков ПЦР на ИППП при беременности создает угрозу выкидыша.

Соскоб для исследования действительно берут из шейки матки, но таким образом, что не затрагивают растущий эмбрион.

К тому же, данная анатомическая область по длине составляет около 4 см вне беременности и несколько уменьшается на поздних сроках гестации. Это позволяет достаточно безопасно взять материал для исследования.

Увеличивают достоверность анализа некоторые простые правила, которые следует соблюдать женщинам перед исследованием:

  1. Пациенткам рекомендуется не мочиться 2-3 часа до выполнения соскоба из шейки матки.
  2. За день до взятия материала необходимо отменить прием антибактериальных и бактериостатических средств.
  3. Вне беременности лучше сдавать мазок в середине менструального цикла. Неблагоприятным периодом считается время до начала менструального кровотечения или сразу после него.
  4. 2-3 дня не рекомендуется использовать локальные средства контрацепции или любые другие вагинальные медикаменты.
  5. Сутки до исследования нельзя иметь половые отношения.
  6. Накануне взятия пробы запрещается принимать душ и обмывать наружные половые органы.
  7. Нельзя брать соскоб из шейки матки в тот же день, когда проводилось кольпоскопическое исследование.

Довольно простые рекомендации позволят наиболее точно определить заболевание, передающееся половым путем, по генетическому материалу его возбудителя.

Показания для ПЦР

Полимеразная реакция как метод диагностики представляет собой новый и инновационный способ идентификации микроорганизмов. К его помощи активно прибегают в следующих случаях:

  1. При установлении причин бесплодия. Невозможность зачать ребенка часто связана с инфекцией половых органов, которую тяжело распознать обычными способами. Латентное течение многих инфекций определяет склонность к прерыванию беременности, несостоятельности имплантации плодного яйца.
  2. При установленной природе инфекционного возбудителя ПЦР проводится для выяснения фазы заболевания: острой или хронической.
  3. Мазки ПЦР у женщин берут в случае тяжело протекающих беременностей. Внутриутробные инфекции, приобретенные до беременности и в ее активное течение, вызывают задержку развития и гибель плода. Рождение детей с аномалиями развития заставляет обследовать мать повторно в послеродовом периоде.
  4. В ходе диагностической процедуры возможно установить также чувствительность и устойчивость микроорганизмов к антибиотикам.

Несмотря на кажущуюся сложность, проведение полимеразной реакции продолжатся не более 4 дней. Это время необходимо для построения полноценной молекулы ДНК, которую удается идентифицировать с конкретным микроорганизмом. Взятие биологического материала как субстрата для анализа и вовсе занимает до 5 минут.

Результат ПЦР-метода имеет два варианта интерпретации: позитивный либо негативный:

  • Положительный ответ полимеразной реакции подтверждает наличие в материале микробных следов, а также указывает род и вид возбудителя.
  • Отрицательный результат говорит о стерильности биологического материала, отсутствии бактерий и вирусных частиц.

На основе расшифровки мазка врач определяется с методикой лечения.

Этиотропные антибиотикотерапия или противовирусное лечение позволяют быстро и бесследно очистить микрофлору от возбудителя опасных инфекций.

Своевременная диагностика не позволяет навредить и растущему плоду во время беременности матери – при проведении терапевтических курсов эрадикации возбудителей инфекций, передающихся половым путем.

Эмпирическая антибактериальная монотерапия в настоящее время рассматривается как стандартное лечение при нейтропенической лихорадке у пациентов с онкопатологией, однако данный подход в ряде случаев может быть неадекватным из-за увеличения распространенности инфекций, вызванных полирезистентными штаммами микроорганизмов.

Пцр (полимеразная цепная реакция). как производится пцр диагностика, показания, как подготовиться к исследованию, результат пцр :: polismed.com

Сайт предоставляет справочную информацию. Адекватная диагностика и лечение болезни возможны под наблюдением добросовестного врача. У любых препаратов есть противопоказания.

Необходима консультация специалиста, а также подробное изучение инструкции! Для адекватного и эффективного лечения многих инфекционных заболеваний необходимо своевременное установление точного диагноза. В решении этой задачи в наши дни привлекаются высокотехнологичные методы диагностики основанные на методах молекулярной биологии.

В настоящий момент  полимеразная цепная реакция (ПЦР) уже достаточно широко применяется в практической медицине как наиболее надежный инструмент лабораторной диагностики. Во-первых, данный метод используется для выявления возбудителей различных инфекционных заболеваний с высокой точностью. Во-вторых, для контроля эффективности проведенного лечения.

В различных руководствах, проспектах, статьях, а также объяснениях врачей-специалистов, мы часто сталкиваемся с употреблением непонятных терминов и слов. Действительно трудно рассказать о высокотехнологичных продуктах науки обыденными словами.

Каждый живой организм имеет свои уникальные гены. Гены располагаются в молекуле ДНК, которая собственно и является «визитной карточкой» каждого конкретного организма. ДНК (генетический материал) – это очень длинная молекула, которая состоит из «кирпичиков», называемых нуклеотидами. У каждого возбудителя инфекционных заболеваний они расположены строго специфично, то есть в определенной последовательности и комбинации. Когда необходимо понять имеется ли у человека тот или иной возбудитель, забирается биологический материал (кровь, моча, слюна, мазок), который содержит ДНК или фрагменты ДНК микроба. Но количество генетического материала возбудителя очень мало, и невозможно сказать какому именно микроорганизму он принадлежат. Для решения этой задачи и служит ПЦР. Суть полимеразной цепной реакции заключается в том, что берется малое количество материала для исследования, содержащего ДНК, а в процессе ПЦР происходит увеличение количества генетического материала, принадлежащего конкретному возбудителю и, таким образом, его можно идентифицировать. Идея метода ПЦР принадлежит американскому ученому K.Mullins, которую он предложил в 1983 году. Однако широкое клиническое применение получила лишь в средине 90-х годов XXвека. Разберемся с терминологией, что же это такое – ДНК и т.д. Каждая клетка любого живого существа (животного, растения, человека, бактерии, вируса) имеет хромосомы. Хромосомы – это хранители генетической информации, которые содержат всю последовательность генов каждого конкретного живого существа. Каждая хромосома состоит из двух нитей ДНК, закрученных в спираль друг относительно друга. ДНК – химически это дезоксирибонуклеиновая кислота, которая состоит из структурных компонентов – нуклеотидов. Нуклеотидов бывает 5 видов – тимин (Т), аденозин (А), гуанин (Г), цитозин (Ц) и урацил (У). Нуклеотиды располагаются друг за другом в строгой индивидуальной последовательности, образуя гены. Один ген может состоять из 20-200 таких нуклеотидов. Например, ген, кодирующий выработку инсулина, состоит из 60 пар нуклеотидов. Нуклеотиды имеют свойство комплементарности. Это означает что напротив аденина (А) в одной цепочке ДНК обязательно стоит тимин (Т) в другой цепочке, а напротив гуанина (Г) – цитозин (Ц). Схематически выглядит следующим образом:

  • Г — Ц Т — А
  • А — Т

Данное свойство комплементарности ключевое для проведения ПЦР.

         Молекулы ДНК и РНК могут «размножаться» (данное свойство используется для проведения ПЦР). Происходит это следующим образом: две нити ДНК или РНК, отходят друг от друга в стороны, на каждую нить садится специальный фермент, который синтезирует новую цепочку.

Синтез идет по принципу комплементарности, то есть, если в исходной цепочке ДНК стоит нуклеотид А, то во вновь синтезированной будет стоять Т, если Г – то Ц и т.д. Этот специальный фермент-«строитель» для начала синтеза нуждается в «затравке» — последовательности из 5-15 нуклеотидов.

Данная «затравка» определена для каждого гена (гена хламидии, микоплазмы, вирусов) экспериментально.

Итак, каждый цикл ПЦР состоит из трех стадий. В первую стадию происходит так называемое раскручивание ДНК – то есть разделение связанных между собой двух цепей ДНК. Во вторую — происходит присоединение «затравки» к участку нити ДНК.

И, наконец, удлинение данных нитей ДНК, которое производится ферментом-«строителем».

В настоящее время весь этот сложный процесс протекает в одной пробирке и состоит из повторяющихся циклов размножения определяемой ДНК с целью получения большого количества копий, которые могут быть, затем выявлены обычными методами. То есть из одной нити ДНК мы получаем сотни или тысячи.

В качестве пробы служит различный биологический материал: кровь и ее компоненты, моча, слюна, отделяемое слизистых оболочек, спинномозговая жидкость, отделяемое раневых поверхностей, содержимое полостей тела. Все биопробы собираются одноразовыми инструментами, а набранный материал заключают в пластиковые стерильные пробирки или помещают на культуральные среды, с последующей транспортировкой в лабораторию. В забранные пробы добавляют необходимые реагенты и ставят в программируемый термостат – термоциклер (амплификатор). В амплификаторе 30-50 раз повторяется цикл ПЦР, состоящий из трех этапов (денатурация, отжиг и удлинение). Что это означает? Рассмотрим подробнее. I этап ПЦР — Подготовка генетического материала для копирования. Происходит при температуре 95° С, при этом нити ДНК разъединяются, и на них могут садиться «затравки». «Затравки» изготавливают промышленным способом различные научно-производственные объединения, а лаборатории покупают уже готовые. При этом «затравка» для выявления, например, хламидии, работает только для хламидии и т.д. Таким образом, если тестируется биоматериал на наличие хламидийной инфекции, то в реакционную смесь помещается «затравка» для хламидий; если тестирование биоматериала на вирус Эпштейн-Барра, то и «затравка» для вируса Эпштейн-Барра.

II этап – Объединение генетического материала возбудителя инфекции и «затравки».

Если имеется ДНК определяемого вируса или бактерии, «затравка» садится на эту ДНК. Этот процесс присоединения «затравки» и есть второй этап ПЦР. Данная стадия проходит при температуре 75°С.

III этап — Копирование генетического материала возбудителя инфекции.

 Это процесс собственно удлинения или размножения генетического материала, который происходит при 72°С. К «затравкам» подходит фермент- «строитель» и синтезирует новую цепочку ДНК. С окончанием синтеза новой цепочки ДНК, заканчивается и цикл ПЦР. То есть за один цикл ПЦР происходит увеличение количества генетического материала в два раза. Например, в исходной пробе имелось 100 молекул ДНК какого-либо вируса, после первого цикла ПЦР в пробе будет уже 200 молекул ДНК тестируемого вируса. Один цикл длится 2-3 минуты.

 Для образования достаточного количества генетического материала для идентификации, обычно производится 30-50 циклов ПЦР, что занимает 2-3 часа.

Собственно ПЦР на этом заканчивается и далее идет не менее значимый этап идентификации. Для идентификации используют метод электрофореза или меченые «затравки». При использовании электрофореза полученные нити ДНК разделяются по размерам, и наличие фрагментов ДНК разной длины свидетельствует о положительном результате анализа (то есть о наличии того или иного вируса, бактерии и т.д.). При использовании меченых «затравок», к конечному продукту реакции добавляют хромоген (краситель), вследствие чего ферментативная реакция сопровождается образованием окраски. Развитие окраски прямо свидетельствует, что вирус или другой выявляемый агент присутствуют в исходной пробе.

На сегодняшний день, используя меченые «затравки», а также соответствующее программное обеспечение, можно производить сразу и «чтение» результатов ПЦР. Это так называемаяreal-time ПЦР.

Одним из существенных преимуществ метода ПЦР является высокая чувствительность – от 95 до 100%. Однако, эти преимущества должны базироваться на непременном соблюдении следующих условий:

  1. корректный забор, транспортировка биологического материала;
  2. наличие стерильного, одноразового инструментария, специальных лабораторий и обученного персонала;
  3. строгое соблюдение методики и стерильности во время проведения анализа

Чувствительность различается для различных выявляемых микробов. Так, например, чувствительность метода ПЦР для выявления вируса гепатита С составляет 97-98%, чувствительность для выявления уреаплазмы – 99-100%. Возможности, заложенные в ПЦР-анализе, позволяют достичь непревзойденной аналитической специфичности. Это означает выявление именно того микроорганизма, который искали, а не похожего или близкородственного. Диагностическая чувствительность и специфичность метода ПЦР, зачастую превосходят таковые и для культурального метода, называемого «золотым стандартом» для выявления инфекционных заболеваний. Учитывая продолжительность выращивания культуры (от нескольких дней до нескольких недель), преимущество метода ПЦР становится очевидным.  

ПЦР в диагностике инфекций

Преимущества метода ПЦР (чувствительность и специфичность) определяют широкий спектр применения в современной медицине. Основные области применения ПЦР-диагностики:

  1. диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний различной локализации
  2. контроль эффективности проведенной терапии
  3. уточнение вида возбудителя

ПЦР используется в акушерстве, гинекологии, неонатологии, педиатрии, урологии, венерологии, нефрологии, клинике инфекционных болезней, офтальмологии, неврологии, фтизиопульмонологии и др. Использование ПЦР-диагностики производится в совокупности с другими методами исследования (ИФА, ПИФ, РИФ и др.). Их сочетание и целесообразность определяет лечащий врач.

Возбудители инфекций, обнаруживаемые методом ПЦР

Вирусы:

  1. ретровирусы HIV-1 и HIV-2
  2. герпетиформные вирусы
  3. вирус простого герпеса 1 и 2 типов
  4. цитомегаловирус
  5. вирус Эпштейна-Барр
  6. варицелла – Зостер вирус
  7. герпес вирусы человека 6 и 7
  8. вирус гепатита С, В и А
  9. вирусы папилломы человека
  10. вирус краснухи
  11. аденовирусы
  12. риновирусы
  13. парвовирусы
  14. пикорновирусы

  Бактерии:

  1. микобактерии
  2. хламидии
  3. микоплазмы
  4. сальмонелла
  5. легионеллы
  6. клостридии
  7. бледная трепонема
  8. различные патогенные виды кишечной палочки
  9. холерный вибрион
  10. риккетсии
  11. золотистый стафилококк
  12.  бактериальный возбудитель менингита
  13. хеликобактер пилори
  14. уреаплазма
  15. возбудитель гонореи
  16. дифтерийная палочка
  17. гемофильная палочка

  В данном списке приведены наиболее распространенные инфекционные агенты, выявляемые методом ПЦР. На самом деле данный список гораздо шире, постоянно пополняется, так как синтезируются новые «затравки». Также следуют отметить, что список определяемых возбудителей определяется наличием «затравок» для идентификации в арсенале каждой конкретной лаборатории.

Наседкина А.К.  

Специальность: Врач офтальмолог

Подготовка к анализу и сдача мазка на ПЦР

ПЦР расшифровывается как полимеразная цепная реакция, которая применяется в различных исследованиях около 30 лет. ПЦР получила широкое распространение в разнообразных отраслях науки, начиная от археологии, генетики и криминалистики и заканчивая венерологией. Метод ПЦР в медицине позволяет установить отцовство, определить инфекционного возбудителя или хромосомную либо генную патологию.

Метод ПЦР по праву считается высокоточным и эффективным способом диагностики, позволяющим выявить и идентифицировать различные вирусные/инфекционные и наследственные болезни.

Данный способ диагностики отличается тем, что дает возможность определить инфекционную или вирусную патологию не только в острой либо хронической стадии, но в инкубационный период, то есть в промежуток времени от момента заражения до появления первых клинических признаков.

Также характерной особенностью метода ПЦР является его специфичность, что исключает получение ложноположительного результата. С помощью ПЦР определяется не только ДНК или РНК, принадлежащей тому либо другому микроорганизму или вирусу, но и их концентрация в исследуемом биоматериале. Таким образом, метод ПЦР осуществляет качественный и количественный анализ ДНК/РНК.

Суть метода ПЦР заключается в обработке биоматериала специальными реактивами, что позволяет выявить чужеродную ДНК. Многократное повышение концентрации ДНК/РНК добиваются с помощью ферментов, добавленных при исследовании биоматериала.Для исследования используются различные жидкости и эпителий человеческого организма. Это может быть кровь, плазма, моча, сперма, сок предстательной железы, вагинальные выделения, соскоб из половых путей и уретры и прочее.

Достоинства диагностики с помощью ПЦР

Положительными моментами метода ПЦР считаются:

  • выявление и идентификация инфекционного возбудителя (даже при отсутствии клинических и других лабораторных данных);
  • одновременное обнаружение нескольких возбудителей инфекции при использовании одного биологического образца;
  • высокая чувствительность метода, исключающая перекрестные реакции;
  • исключение получения ложноположительных реакций.

Какие инфекции выявляют методом ПЦР

С помощью метода ПЦР возможно определить в организме человека следующие инфекции:

  • вирус гепатита (А, В, С, на А ни В, Д);
  • цитомегаловирус;
  • вирус герпеса;
  • ВИЧ;
  • энтеровирус;
  • токсоплазмоз;
  • возбудители краснухи, коклюша, листериоза;
  • кисломолочные грибы (урогенитальный кандидоз);
  • уреаплазма;
  • микоплазма;
  • хламидии;
  • вирус папилломы человека;
  • возбудитель инфекционного мононуклеоза.

Как подготовиться к сдаче мазка на ПЦР

Врач, назначая день сдачи мазка на ПЦР, учитывает день менструального цикла пациентки. Оптимально сдавать мазок накануне месячных или через 3 — 4 дня после их окончания.

Мазок на ПЦР исключается брать в период кровянистых выделений, включая менструальные и дни и время ациклического кровотечения, иначе в соскоб попадет кровь, что затруднит проведение анализа или сделает его выполнение невозможным (поскольку анализ методом ПЦР платный — деньги пропадут).

Несмотря на то, что процедура забора мазка из половых путей проста, врачи рекомендуют соблюсти ряд мер перед сдачей анализа:

  • отказаться от использования вагинальных суппозиториев, тампонов, таблеток за 3 дня до сдачи мазка;
  • пролечиться по поводу обильных влагалищных белей и только после лечения сдавать мазок;
  • отказаться от половых контактов за 3 суток до забора биоматериала;
  • воздержаться от применения средств интимной гигиены накануне и в день взятия мазка (подмываться чистой водой);
  • отказаться от спринцеваний за день до сдачи мазка.

Также необходимо учитывать следующее: при проведении антибиотикотерапии (по любому поводу) мазок из половых путей берется через 3 недели после окончания лечения. Перед забором мазка нет нужды соблюдать какие-либо ограничения по питанию и физической активности.

Процедура взятия мазка

Забор биоматериала у женщин на скрытые половые инфекции производится из трех точек: мочеиспускательного канала, канала цервикса и влагалищных стенок. Как правило, производится взятие мазка из цервикального канала. Схема последовательных действий:

  • пациентка укладывается на гинекологическое кресло;
  • врач в стерильных перчатках производит осмотр наружных половых органов, вводит во влагалище гинекологическое зеркало и удаляет слизь с наружного зева и из влагалища ватным тампоном;
  • забор мазка из цервикального канала производится специальной одноразовой щеточкой, которая соскабливает эпителий;
  • полученный материал вместе со щеточкой помещают в стерильную пробирку, плотно укупоривают ее и отправляют в лабораторию.

Взятие материала из шеечного канала и стенок влагалища является безболезненной процедурой, но в некоторых случаях женщина испытывает легкий дискомфорт и раздражение в ходе процедуры.

Получение результатов и их расшифровка

В большинстве случаев результаты анализа мазка методом ПЦР можно получить уже на следующий день. По показаниям возможно получение результатов в день исследования пациентки. Расшифровка анализа не составляет трудностей. Если возбудитель предполагаемой инфекции отсутствует, то в анализе ставится прочерк (отрицательный результат).

При обнаружении ДНК/РНК тех или иных инфекционных агентов в биоматериале напротив перечисленных инфекций ставятся плюсы (положительный результат). Обнаружение скрытой половой инфекции требует назначения лечения женщине и ее постоянному половому партнеру.

После окончания лечения (спустя 3 недели) производится новый забор биоматериала (контроль эффективности противовоспалительной и антибактериальной терапии).

Показания для сдачи мазка на ПЦР из половых путей

Сдача мазка на скрытые половые инфекции методом ПЦР показано в случае:

  • наличия признаков воспаления в мочеполовом тракте;
  • незащищенного полового акта со случайным партнером;
  • наличия трех и более половых партнеров в течение года;
  • бесплодия;
  • планирования беременности;
  • проведения ЭКО и других методик ВРТ;
  • планирования операции на половых органах.

Что выявляет мазок на ПЦР

Исследование биоматериала из половых путей методом ПЦР выявляет:

  • гонококков;
  • трихомонад;
  • хламидии;
  • герпетическую инфекцию;
  • микоплазмы и уреаплазмы;
  • вирус папилломы человека;
  • гарднереллы;
  • грибы.

Обычно производится исследование на весь спектр перечисленных инфекций. У большинства пациенток определяется две или более инфекции.

Количество прочтений: 2247 29.01.2020

Оставьте комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Adblock
detector